Η χλωροφύλλη είναι μια πράσινη χρωστική ουσία που βρίσκεται στα ανώτερα φυτά και σε όλους τους άλλους φωτοσυνθετικούς οργανισμούς. Η χλωροφύλλη Α και η χλωροφύλλη Β είναι διαλυτές σε αιθανόλη, αιθέρα και ακετόνη και άλλους διαλύτες, αδιάλυτες σε νερό και πετρελαϊκό αιθέρα, επομένως, μπορούν να χρησιμοποιήσουν πολικούς διαλύτες όπως ακετόνη, μεθανόλη, αιθανόλη, οξικό αιθυλεστέρα και ούτω καθεξής για την εκχύλιση χλωροφύλλης.
Διαδικασία εκχύλισης χλωροφύλλης:
Η εκχύλιση χλωροφύλλης παρασκευάζεται σε μισοσκότεινο δωμάτιο στους 25 βαθμούς C. Τα βήματα εκχύλισης είναι τα εξής:
(1) Πάρτε 1000 γραμμάρια φρέσκα πράσινα φύλλα και θρυμματίστε τα σε ένα Wechsler.
(2) Βάλτε τα θρυμματισμένα 1000 γραμμάρια πράσινων φύλλων σε ασετόν με μια μικρή ποσότητα ανθρακικού ασβεστίου (θερμοκρασία 20 βαθμοί ) για εκχύλιση, έως ότου τα θραύσματα των φύλλων είναι άχρωμα μετά το φιλτράρισμα και τον καθαρισμό.
(3) Τοποθετήστε το διηθημένο εκχύλισμα ακετόνης σε ένα χωνί που περιέχει 1 λίτρο πετρελαϊκού αιθέρα και 100 mL ακετόνης, και στη συνέχεια περιστρέψτε απαλά, ενώ προσθέτετε απεσταγμένο νερό μέχρι να στρωματοποιηθεί. Οι περισσότερες από την ακετόνη και τις υδατοδιαλυτές ακαθαρσίες στο στρώμα νερού απορρίπτονται, αφήνοντας μόνο διάλυμα πετρελαϊκού αιθέρα.
(4) Αφού το διάλυμα πετρελαϊκού αιθέρα καθαριστεί ξανά με απεσταγμένο νερό, καθαρίζεται περισσότερες από 5 φορές με 200 ml 80 τοις εκατό διάλυμα μεθανόλης που περιέχει πετρελαϊκό αιθέρα και 0,01 g οξαλικό οξύ και τελικά λαμβάνεται κιτρινοπράσινο εναιώρημα .
(5) Στεγνώστε το εναιώρημα με άνυδρο θειικό νάτριο και διηθήστε το σε στήλη από σκόνη σακχαρόζης πάχους 3 cm. Στη συνέχεια, καθαρίστε τις κατακρημνισμένες χρωστικές για να αφαιρέσετε τα καροτενοειδή και να τις κάνετε να περιέχουν μόνο φυσική χλωροφύλλη.
(6) Η στήλη σακχαρόζης που περιέχει φυσική χλωροφύλλη χωρίζεται σε δύο στρώματα, το πράσινο στρώμα έχει 4-10mm στρώμα χλωροφύλλης Β, το άλλο μπλε στρώμα είναι 2-6mm στρώμα χλωροφύλλης Α.
(7) Το τμήμα που βρίσκεται στη μέση του μπλε στρώματος (περίπου το μισό του μπλε στρώματος) τοποθετείται σε αιθέρα, το εναιώρημα διηθείται και εκχυλίζεται, καθαρίζεται με απεσταγμένο νερό, ξηραίνεται με θειικό νάτριο και φιλτράρεται με σκεύη για να ληφθεί χλωροφύλλη ΕΝΑ.
(8) Αφαιρέστε το μεσαίο τμήμα του πράσινου στρώματος στο (6) και τοποθετήστε το γρήγορα στον αιθέρα για φιλτράρισμα και πλύσιμο για να φτιάξετε διάλυμα χλωροφύλλης Β αιθέρα.
Πώς να διαχωρίσετε κατά την εξαγωγή;
Η χρωματογραφία είναι μια σημαντική μέθοδος διαχωρισμού, καθαρισμού και ταυτοποίησης οργανικών ενώσεων, ιδιαίτερα στη μικροανάλυση χρησιμοποιείται ευρέως. Οι χρωστικές στα φρούτα και τα λαχανικά περιλαμβάνουν κυρίως λιποδιαλυτή καροτίνη, λουτεΐνη, χλωροφύλλη και υδατοδιαλυτή ανθοκυανίνη. Σε πειράματα εκχύλισης, μπορούμε να χρησιμοποιήσουμε την αρχή της παρόμοιας αναμιξιμότητας φιλτράρισμα υδατοδιαλυτών ανθοκυανινών, το οποίο με τη σειρά του μπορεί να χρησιμοποιήσει χρωματογραφία λεπτής στιβάδας, χρωματογραφία στήλης, υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) για διαχωρισμό βήτα-καροτίνης, λουτεΐνης και η χλωροφύλλη, εξασθενημένη λόγω της πολικότητας των τριών τύπων χρωστικής με τη σειρά της, μπορεί να επιλεγεί κατάλληλα μεμονωμένος οργανικός διαλύτης ή διαφορετική αναλογία μικτού διαλύτη ως παράγοντα διαστολής και παράγοντα έκλουσης. Προσδιορίστηκαν οι βέλτιστες συνθήκες διαχωρισμού.
